Glikoproteina Tamm-Horsfall łączy wrodzoną aktywację komórek immunologicznych z odpornością adaptacyjną poprzez mechanizm zależny od receptora Toll-4 cd

LPS indukowała ekspresję TF w komórkach HUVEC, podczas gdy THP nie był w stanie indukować TF w komórkach śródbłonka, nawet w traktowanych IFN – y komórkach, które są wysoce wrażliwe na LPS (Figura 2C). Wyniki te sugerują różnicę funkcjonalną w sygnalizacji LPS i THP. Łącznie, te eksperymenty wykluczają możliwość wpływu THP na DC ze względu na zanieczyszczenie LPS. Aby wykluczyć cząsteczki zanieczyszczające inne niż LPS, standardowy preparat THP otrzymany przez powtarzane wytrącanie NaCl z moczu dalej oczyszczono za pomocą 2 kolejnych procedur, wykorzystując fakt, że THP tworzy żel, gdy obecne są jednowartościowe jony powyżej 60 mM. Po indukcji tworzenia żelu przez 70 mM fosforan sodu, THP oczyszczono przez ultrawirowanie (23). Frakcja peletek zawierająca THP była w pełni aktywna na splenocytach C57BL / 6 dla TNF-a. i wytwarzanie IL-6 (Figura 2D i dane nie pokazane). Ponadto ultrawirowany THP był dalej oczyszczany na filtrze ziemi okrzemkowej, który znany jest z oczyszczania THP do homogenności (24). Ten preparat THP wysoce oczyszczony za pomocą 3 różnych metod wciąż był w stanie indukować TNF-a. produkcja (rysunek 2D). Dane te silnie wskazują, że THP, ale nie inne możliwe zanieczyszczenia, stymulują komórki mieloidalne do indukowania produkcji cytokin. Skutki funkcjonalne indukowanego THP dojrzewania DC. Inną cechą charakterystyczną dojrzałych DC jest ich zdolność do wyzwalania silnej stymulacji komórek T. Aktywowane THP ludzkie DC zastosowano jako komórki stymulujące w standardowej mieszanej hodowli limfocytów (MLC). Interakcja THP z niedojrzałymi DC doprowadziła do dramatycznego zwiększenia ich zdolności stymulacyjnej (Figura 3A). Dalsza analiza produkcji cytokin limfocytów T wykazała, że wysokie poziomy IL-2 i IFN-a istniały w allogenicznych hodowlach komórek T poddanych prowokacji DC traktowanymi THP (Figura 3B). Dane te wykazują silną reaktywność komórek T, która występuje po aktywacji niedojrzałych DC przez THP. Figura 3: Wywołanie zdolności stymulacyjnej komórek T i odpowiedź immunologiczna typu przez THP. (A) Niedojrzałe ludzkie DC pochodzące z monocytów stymulowano THP lub LPS, intensywnie płukano, napromieniano, a następnie hodowano wspólnie z wysoce oczyszczonymi allogenicznymi limfocytami T we wskazanych stosunkach. Po 48 godzinach komórki zastosowano jako stymulatory alogeniczne, jak opisano powyżej. Syntezę DNA oceniano w dniu 5 i wyrażono jako średnią liczbę zliczeń na minutę reprezentatywnego doświadczenia. SD potrójnych wynosiła ogólnie poniżej 20%. Podobne wyniki uzyskano w 4 innych eksperymentach. (B) W celu wytworzenia cytokiny komórek T, niedojrzałe DC stymulowano THP we wskazanych stężeniach lub LPS, intensywnie płukano, napromieniano, a następnie hodowano z wysoko oczyszczonymi allogenicznymi komórkami T przy stosunku komórek DC / T wynoszącym 1: 2. Supernatanty pozbawione komórek zebrano i analizowano za pomocą ELISA pod kątem IL-2 i IFN-y. wydzielanie. Dane są wyrażone jako średnie. SEM 4 różnych kombinacji dawcy. THP indukuje aktywację p38-MAPK, ERK-1/2 i Akt. Stwierdzono, że dojrzewanie DC wiąże się z fosforylacją odrębnych kinaz tyrozynowych, w tym ERK, p38 i Akt (25). Dodanie THP do ludzkich DC (Figura 4A) lub mysich makrofagów (Figura 4B) doprowadziło do szybkiej fosforylacji p38-MAPK i ERK w ciągu 15. 30 minut. Co ciekawe, konsekwentnie stwierdziliśmy opóźnioną kinetykę fosforylacji p38 i ERK w porównaniu z LPS. Następnie przeanalizowaliśmy szlak PI3K / Akt, który bierze udział w aktywacji i przeżyciu wielu typów komórek, w tym DC (25). Szczyt fosforylacji Akt w stymulowanych LPS hodowlach DC został wykryty po 30 minutach, podczas gdy DC stymulowane THP wykazywały również przesunięcie kinetyczne widziane w profilu aktywacji MAPK (Figura 4C). Wysoce selektywne inhibitory ERK-1/2 (PD98059 i UO126) lub p38 (SB203580) skutecznie blokowały indukowany THP TNF-a. wytwarzanie w niedojrzałych DC, wykazujące wymaganie aktywacji MAPK do wytwarzania cytokin (Figura 4D). Wyniki te wskazują, że THP angażuje szlaki sygnałowe DC podobne do tych z LPS i wskazuje na krytyczne zaangażowanie fosforylacji MAPK w aktywacji DC za pośrednictwem THP. Ryc. 4. Nieunitulujące działanie THP zależy od kinazy p38-, ERK-1/2 . MAPK i sygnalizacji NF-kB. Niedojrzałe ludzkie DC (A) lub mysie makrofagi (B) inkubowano z THP, LPS lub pożywką. Następnie, fosfo-p38 (p-p38) i fosfo-ERK-1/2 (p-ERK) oznaczono metodą immunoblottingu; odpowiednio p38 i ERK-2 wykryto z usuniętych membran. Bloty są reprezentatywne dla 4 niezależnych eksperymentów. (C) Niedojrzałe DC inkubowano z THP, LPS lub pożywką, a fosfo-Akt (p-Akt) jak również całkowitą Akt określono z lizatów całych komórek metodą immunoblotów.
[przypisy: odchudzanie roku vita slim opinie, tomaszowskie centrum zdrowia, olej lniany na odchudzanie ]
[więcej w: ile kalorii ma mozzarella, profilaktin koncentracja, paznokcie w kształcie migdałów ]