Komórki dendrytyczne są genetycznie modyfikowane w celu ekspresji hamowania zapalenia stawów indukowanego kolagenem przez IL-4 ad 6

Dane te reprezentują nie tylko migrację DC do śledziony, ale także czas trwania transdukowanej ekspresji genów w śledzionie. Znaczącą liczbę komórek EGFP + można było wykryć w dniu i nieznacznie spadła do dnia 2. Liczba komórek EGFP + została następnie zmniejszona do dnia 4 (dane nie pokazane). Transdukowane DC IL-4P hamują trwające odpowiedzi Th1 in vitro i in vivo. Zarówno odporność komórkowa Th1, jak i humoralna odpowiedź immunologiczna na CII są ważne dla początku artretyzmu (26-28). Aby zbadać zdolność transdukowanych DC dla IL-4P do hamowania odpowiedzi Th1 na CII in vitro, komórki śledziony z myszy, które immunizowano CII, hodowano z pozornie transdukowanymi lub transdukowanymi DC IL-4p w obecności CII. Stransdukowane DC IL-4P wykazywały znaczącą zdolność do zmniejszania IFN-y. wytwarzanie w odpowiedzi na CII, podczas gdy próbki DC nie miały wpływu (Fig. 4). Wiadomo, że poziomy izotypów IgG2a i IgG1 są skorelowane odpowiednio z odpowiedziami Th1 i Th2, a zatem mogą być stosowane jako wskaźnik bieżących odpowiedzi komórek T in vivo. Poprzednie badania wykazały znaczenie izotypu przeciwciał IgG2a dla CII do indukcji CIA. Przeanalizowaliśmy poziomy różnych izotypów przeciwciał przeciwko CII w surowicy po leczeniu stransdukowanych DC IL-4 (Fig. 5, tabela 1). Poziomy IgG2a anty-CII były zmniejszone w grupach, które były leczone przez DC transdukowane IL-4P, ale tylko dootrzewnowa grupa terapeutyczna osiągnęła statystycznie istotną różnicę. Ponieważ poziomy IgG1 anty-CII różniły się znacznie w próbkach w każdej grupie eksperymentalnej, nie zaobserwowano znaczącej różnicy poziomów IgG1 między grupami. Dane te sugerują, że transdukowane DC IL-4P tłumią trwające odpowiedzi Th1 i związane z nimi odpowiedzi przeciwciał na CII in vivo. Figura 4 Wpływ DC transdukowanych IL-4P na IFN-y wytwarzanie przez komórki śledziony od myszy immunizowanych CII in vitro. Śledziony zebrano od myszy 15 dni po immunizacji CII. Komórki hodowano ze wskazanymi stosunkami stransdukowanych pozornie lub transdukowanych IL-4p DC w obecności CII (100 .g / ml). Dziewięćdziesiąt sześć godzin później zbierano supernatanty i analizowano pod kątem IFN-y. za pomocą testu ELISA. Dane są średnie. SEM duplikatów kultur. Figura 5 Wpływ DC transdukowanych IL-4P, wstrzykniętych podskórnie, dożylnie lub dootrzewnowo na przeciwciała anty-CII. Myszy immunizowano CII w dniu 0. W dniu 15, siedem lub osiem myszy na grupę otrzymało wstrzyknięcia podskórne, dożylne lub dootrzewnowe 3x 105 transdukowanych IL-4P DC. Miana przeciwciał anty-CII IgG2a (wypełnione słupki) i IgG1 (otwarte słupki) Abs w surowicach w dniach 36 i 48 mierzono za pomocą testu ELISA. Każda kolumna reprezentuje średnią dowolną jednostkę (AU). SEM siedmiu lub ośmiu pojedynczych myszy. AP <0,05 w porównaniu z kontrolą. BP <0,01 w porównaniu z kontrolą. Ani komórki T transdukowane IL-4P, ani komórki NIH 3T3 transdukowane IL-4p nie hamują CIA. Chociaż wydaje się, że unikalna zdolność DC do migracji do tkanek limfoidalnych i oddziaływanie bezpośrednio z limfocytami T jest wymagana do supresji CIA, w której pośredniczą transdukowane komórki IL-4., możliwe jest spekulowanie, że ogólnoustrojowe poziomy wydzielanej IL-4 z tych komórek wystarczają do wywołania efektu ochronnego. Aby rozwiązać ten problem dalej, zbadaliśmy, czy komórki transdukowane IL-4 (3 inne niż DC hamują CIA. W tym badaniu zastosowano linię komórek mysich NIH 3T3 fibroblastów transdukowanych IL-4; oczekiwano, że będzie wytwarzać IL-4 układowo, bez migracji do narządów limfoidalnych. Chociaż te komórki mogą być odrzucone przez odpowiedź allogeniczną, poprzednie badanie z użyciem komórek NIH 3T3 transdukowanych IL-1Ra pokazuje, że przeżywają i wydzielają transdukowany produkt przez co najmniej 7 dni u myszy DBA / (29). Transdukowane IL-4P komórki NIH 3T3 wytwarzały tę cytokinę na poziomie 500 ng / 106 komórek na 24 godziny. Transdukowane IL-4p pierwotne komórki T testowano także pod kątem zdolności do hamowania CIA. Komórki T mogą migrować do narządów limfoidalnych, ale, w przeciwieństwie do DC, nie oddziaływują bezpośrednio z innymi lokalnymi komórkami T. Transdukcję retrowirusową do śledzionowych limfocytów T aktywowanych za pomocą unieruchomionego anty-CD3 / anty-CD28 osiągnięto stosując filtrowany supernatant retrowirusowy na płytkach wstępnie powleczonych RetroNectin. Około 50% limfocytów T było transdukowanych, stosując ten protokół, co oceniono za pomocą cytometrii przepływowej dla komórek T transdukowanych EGFP (danych nie przedstawiono). Transdukowane komórki T wzbogacono puromycyną, a następnie reaktywowano przez 24 godziny z unieruchomionym anty-CD3 / anty-CD28. Komórki przemyto i hodowano przez dodatkowe 24 godziny w celu pomiaru wytwarzania IL-4. Te poliklonalne transdukowane komórki T IL-4. wytwarzały IL-4 na poziomie 5 ng / 106 komórek na 24 godziny, podczas gdy IL-4 nie wykryto w supernatantach hodowli nietransdukowanych limfocytów T lub transdukowanych przez EGFP limfocytach T [podobne: kamikadze, pompa insulinowa refundacja, ból piszczeli po bieganiu ] [podobne: witamina c lewoskrętna wikipedia, osocze bogatopłytkowe opinie, tomaszowskie centrum zdrowia ]