Komórki dendrytyczne są genetycznie modyfikowane w celu ekspresji hamowania zapalenia stawów indukowanego kolagenem przez IL-4 ad 7

Liczbę iniekowanych komórek skorygowano w oparciu o ich zdolność do wytwarzania IL-4 in vitro. Dlatego myszy otrzymały iniekcje dootrzewnowe 3x 105 transdukowanych IL-4 DC, 3 x 106 niepoddanych transdukcji lub transdukowanych IL-4p komórek T lub 3 x 104 niepoddanych transdukcji lub transdukowanych IL-4p komórek NIH 3T3 w dniu 15 po immunizacji CII. . Zgodnie z wynikami przedstawionymi wcześniej, IL-4P transduced-DC znacząco zmieniło przebieg zapalenia stawów. Przeciwnie, ani komórki T transdukowane IL-4P, ani komórki NIH 3T3 transdukowane IL-4P nie wykazywały statystycznie istotnej zdolności do hamowania początku lub zmniejszenia ciężkości CIA (Figura 6). Figura 6 Wpływ transdukowanych IL-4P limfocytów T lub transdukowanych IL-4p NIH 3T3 na częstość (a), średnie odsetki kończyn z zapaleniem stawów (b) i średni wynik kliniczny (c) CIA. Myszy immunizowano CII w dniu 0. W dniu 15, osiem myszy na grupę otrzymało dootrzewnowe iniekcje 3 x 105 IL-4P transdukowanych DC, 3 x 106 nietransdukowanych lub IL-4p transdukowanych komórek T lub 3 x 104 niepoddanych transdukcji lub Transdukowane IL-4P komórki NIH 3T3. Zwierzęta kontrolne otrzymały HBSS. Ocenę kliniczną oceniano zgodnie z opisem w Metodach. AP <0,05 w porównaniu z kontrolą. BP <0,01 w porównaniu z kontrolą. Transdukowane DC IL-4P zmieniają równowagę odpowiedzi Th1 i Th2 w śledzionie. Aby wyjaśnić, czy DC transdukowane IL-4P mogą modyfikować wzór cytokin z komórek T in vivo, śledziony usuwano 7 dni po śródotrzewnowym podawaniu DC. Komórki śledziony hodowano z CII lub anty-CD3, a supernatanty z hodowli analizowano następnie pod kątem IFN-y. i IL-4 (Figura 7). Chociaż nie wykryto wytwarzania IL-4 przez śledzionowe komórki T w odpowiedzi na CII, wytwarzanie IL-4 w odpowiedzi na anty-CD3 znacznie zwiększono przez podawanie transdukowanych DC IL-4P i nieznacznie zwiększono przez podawanie pozornie transdukowanych DCs. Konsekwentnie, IFN-y wytwarzanie w odpowiedzi na anty-CD3 było znacząco zmniejszone przez podawanie stransdukowanych DC IL-4P. Wyniki te wskazują, że transdukowane DC IL-4P zmieniają równowagę komórek Th1 / Th2 w śledzionie i powodują przesunięcie w kierunku odpowiedzi Th2. Figura 7 Wpływ DC transdukowanych IL-4P na wzór cytokiny komórek T w śledzionie. Myszy immunizowano CII w dniu 0. W dniu 15 myszy otrzymywały dootrzewnowe iniekcje 3 x 105 pozornie transdukowanych (szare słupki) lub stransdukowanych IL-4p (wypełnione słupki) DC. Zwierzęta kontrolne otrzymały HBSS (otwarte słupki). W dniu 21 zebrano śledziony. Komórki hodowano przez 72 godziny z anty-CD3 (5 .g / ml) lub przez 96 godzin w obecności CII (100 .g / ml). Supernatanty hodowli analizowano na obecność IFN-y. i IL-4 w teście ELISA. Dane są średnie. SEM z potrójnych hodowli. Przedstawione dane pochodzą z jednego eksperymentu reprezentatywnego dla dwóch identycznych eksperymentów. Dyskusja Zdolność DC do migracji do tkanek limfoidalnych i modulowania odpowiedzi immunologicznej limfocytów T może zapewnić nową strategię leczenia chorób autoimmunologicznych. Opisane tu eksperymenty potwierdzają możliwość zastosowania do tego celu zmodyfikowanych genetycznie DC. Czas trwania ekspresji kodowanego przez wirus genu w śledzionie wydaje się być bardzo ograniczony w oparciu o kinetykę pojawiania się komórek EGFP +. Wyniki te wskazują, że liczba komórek EGFP + została zmniejszona do 4. dnia po podaniu. Chociaż to odkrycie można wyjaśnić kilkoma możliwymi scenariuszami, prawdopodobnym wyjaśnieniem jest to, że DC zostały wyeliminowane przez apoptozę podczas interakcji z aktywowanymi komórkami T (30, 31). Co ważne, pomimo przejściowego utrzymywania się wstrzykniętych DC w śledzionie, DC-trans DC wywołane przez IL-4. hamowało patogenne odpowiedzi Th1 in vivo. Doniesiono, że ciągłe podawanie IL-4 przez wszczepioną pompę opóźnia wystąpienie CIA i że supresja wiąże się z obniżonymi poziomami IgG2a przeciwko CII (18). Należy jednak podkreślić, że w naszym badaniu trwająca odpowiedź Th1 była tłumiona przez pojedyncze wstrzyknięcie stransdukowanych DC IL-4P. Kilka eksperymentalnych podejść potwierdza hipotezę, że hamujący wpływ DC transdukowanych IL-4P na CIA wynika z ich migracji do narządów limfoidalnych, w których występują patogenne reakcje immunologiczne. Najpierw myszy, które otrzymały transdukowane DC IL-4P, były krwawione w dniach 1, 4 lub 7, a poziomy IL-4 w surowicy określano za pomocą testu ELISA. Nie wykryto żadnej cytokiny w surowicy, nawet po podaniu 10-krotnie większej liczby transdukowanych DC IL-4. (3 x 106). To odkrycie sugeruje, że jest mało prawdopodobne, że zahamowanie choroby było spowodowane wysokim ogólnoustrojowym poziomem IL-4. Po drugie, skutki DC różniły się w zależności od drogi podawania; zapalenie stawów było najskuteczniej hamowane przez wstrzyknięcie dootrzewnowe, następnie wstrzyknięcie dożylne, a w mniejszym stopniu wstrzyknięcie podskórne [więcej w: kamikadze, rak płaskonabłonkowy płuca, przygotowanie do rektoskopii ] [hasła pokrewne: olej lniany na odchudzanie, niedobór witaminy d3 objawy u dorosłych, przygotowanie do rektoskopii ]