Mutacje receptora melanokortyny-4 są częstą i niejednorodną przyczyną chorobliwej otyłości ad 5

Podobny wynik, potwierdzający dane opublikowane wcześniej (15), stwierdzono dla drugiej polimorficznej zmiany, Val103Ile (nie pokazano). Figura 1Funkcjonowanie mutantów MC4-R związanych z otyłością. (a (d) Aktywność receptorów bada się analizując ich zdolność do aktywowania ekspresji indukowanego cAMP genu fuzyjnego lucyferazy. Komórki trwale eksprymujące każdy receptor i przejściowo eksprymujące konstrukt fuzyjny stymulowano przez 6 godzin samą pożywką, zwiększając ilości a-MSH lub 8Br-cAMP, po czym zmierzono aktywność lucyferazy. Punkty danych reprezentują średnie z pięciu oznaczeń podzielone przez maksymalne poziomy aktywności lucyferazy uzyskane przez mM 8Br-cAMP (średnia z pięciu oznaczeń). Paski błędów wskazują SD. Krzywą aktywacji receptora typu dzikiego pokazano na wszystkich wykresach w celu porównania z: (a) polimorficzną mutacją Ile251Leu; (b) mutacje Thr150Ile, Arg165Trp, Ile170Val i Ile301Thr; (c) mutacja Leu250Gln; (d) mutacje ThrllSer i Arg18Cys na końcu NH2. EC50. SD podano w nawiasach dla każdego wariantu receptora. (e) Wiązanie [125I] NDP-a-MSH z komórkami 293 przejściowo transfekowanymi dzikim i zmutowanym MC4-R. Komórki inkubowano z subsakratującą ilością znakowanego [125I] NDP-a-MSH (200 pM) w warunkach opisanych w Methods. Specyficzne wiązanie pochodziło z całkowitego wiązania minus niespecyficzne wiązanie. Punkty danych reprezentują średnią z trzech niezależnych eksperymentów przeprowadzonych w trzech powtórzeniach i znormalizowanych do wiązania typu dzikiego dla każdego eksperymentu. Paski błędów wskazują SD. (f) Test wiązania konkurencji. Stabilnie transfekowane komórki inkubowano z [125I] NDP-a-MSH w obecności wzrastających stężeń a-MSH. Wszystkie krzywe są reprezentatywne dla trzech różnych doświadczeń, a każdy punkt jest średnią z trzech wartości. Paski błędów wskazują SD. Oś rzędna jest wyrażona jako procent całkowitego swoistego wiązania (Bmax). Krzywe są dopasowywane przy użyciu nieliniowej analizy regresji i modelu pojedynczej konkurencji (GraphPad Prism). IC50. SD podano w nawiasach dla każdego receptora. Mutacje Thr150Ile, Arg165Trp, Ile170Val i Ile301Thr doprowadziły do zmniejszenia aktywacji receptora w naszym teście (Figura 1b). Wynik ten może wynikać ze zmniejszonej ekspresji tych zmutowanych receptorów w błonie komórkowej, zmniejszonego powinowactwa do liganda lub wadliwej funkcji całkowitej błony zmutowanego receptora. W celu dalszego zbadania defektów spowodowanych przez te mutanty oceniliśmy powinowactwo do ligandu komórek wyrażających te zmutowane receptory w teście wiązania. W obecności ilości substratu (200 pM) [125I] NDP-p MSH, specyficzne wiązanie z trwale transfekowanymi (nie pokazanymi) i przejściowo transfekowanymi komórkami eksprymującymi mutanty Arg165Trp, Ile170Val lub Ile301Thr zostały zredukowane o ponad 80%, jak to opisano poniżej. w porównaniu z komórkami typu dzikiego wskazującymi na silne obniżenie ekspresji na powierzchni komórki i / lub powinowactwa ligandu tych zmutowanych receptorów (Figura 1e). Mutacja Thr150Ile doprowadziła do pośredniej redukcji wiązania receptora (Figura 1e), zarówno w przejściowo, jak i stabilnie transfekowanych komórkach. W teście wiązania konkurencyjnego mutacja ta powodowała wzrost IC50 dla a-MSH, w porównaniu z receptorem typu dzikiego (Figura 1f). Mutacja Leu250Gln wyświetla nieoczekiwany wzór aktywacji. Ten receptor wykazał znaczny wzrost podstawowej aktywności (figura 1c) i pełną aktywację przez a-MSH. Wynik ten został potwierdzony przez porównanie aktywności tego mutanta z aktywnością MC4-R typu dzikiego w warunkach podstawowych w teście przejściowym (dane nie przedstawione). Ten receptor ma 10-krotnie wyższe powinowactwo do a-MSH, jak określono w teście wiązania konkurencyjnego (Figura 1f). Mutacje Arg18Cys i Thr11Ser, oba zmieniające się aminokwasy w pozakomórkowej części NH4-końcowej MC4-R, nie miały większego wpływu na aktywność receptora w naszym cAMP-zależnym teście lucyferazy (Figura 1d) ani na powinowactwo do. -MSH w teście wiązania konkurencyjnego (Figura 1f). Charakterystyka kliniczna chorych z otyłością chorych z mutacjami MC4-R. Aby wyszukać określone fenotypy w nowo odkrytych nośnikach mutacji MC4-R, porównaliśmy kliniczną i biologiczną charakterystykę tych pacjentów z cechami innych chorobowo otyłych osobników badanych pod kątem mutacji jako kontroli (Tabela 2). Średni BMI, maksymalny BMI osiągnięty podczas dorosłego życia i minimalny BMI osiągnięty po okresach ograniczenia kalorycznego był podobny zarówno dla zmutowanych, jak i niezmutowanych grup (odpowiednio P = 0,6 i P = 0,5). Przeciwnie, retrospektywna historia wagi wskazuje, że otyli nosiciele mutacji MC4-R mają zwiększoną tendencję do otyłości u dzieci w porównaniu z innymi badanymi osobnikami (67 vs.
[przypisy: depilacja laserowa twarzy, paznokcie w kształcie migdałów, centrum onkologii warszawa roentgena ]
[przypisy: niedobór witaminy d3 objawy u dorosłych, przygotowanie do rektoskopii, centrum onkologii warszawa roentgena ]