Mutacje w ludzkim genie SC4MOL kodującym oksydazę sterolową powodują łuszczycowe zapalenie skóry, małogłowie i opóźnienie rozwojowe czesc 4

Stwierdzono, że stopień podziału komórkowego był wyższy w fibroblastach od pacjentów niż w komórkach kontrolnych podczas hodowli w pożywce z ograniczonym poziomem cholesterolu, w warunkach, w którym stymulowana jest biosynteza cholesterolu de novo (Figura 3A i odnośnik 13). Pięć różnych normalnych linii fibroblastów o różnych pasażach zastosowano jako kontrole. Stosunek S-G2-M do G0-G1 w fibroblastach skóry pacjenta był 3-krotnie wyższy niż w komórkach kontrolnych (Figura 3B). Ten stosunek osiągnął wartość szczytową po 2-3 dniach wzrostu w pożywce o ograniczonym poziomie cholesterolu i odpowiadał szczytom metylomerów komórkowych i białka całkowitego (tabela 2). Tak więc, pożywka z ograniczonym poziomem cholesterolu indukowała komórki pacjenta do przejścia do S-G2-M, co implikuje związek między wytwarzaniem MAS i podziałem komórek. Aby dodatkowo zbadać tę możliwość, hodowaliśmy transformowane ludzkie limfoblasty kontrolne w obecności inhibitora oksydazy sterolowej, 3-amino-1,2,4-triazolu (ATZ) (14, 15). W tych warunkach stosunek S-G2-M / G0-G1 wzrósł 3-krotnie w leczonych limfoblastach, podczas gdy ani symwastatyna (inhibitor reduktazy HMG-CoA), ani flukonazol (słaby inhibitor 14. Demetylazy lanosterolu; CYP51) znaczący wpływ na progresję cyklu komórkowego (Figura 3C). Silniejszego inhibitora mikonazolu nie użyto tutaj ze względu na jego niekorzystny wpływ na wzrost komórek. Dane te zdecydowanie sugerują, że zmiany w oksydazie metylowej sterolu wpływają na aktywację cyklu komórkowego. Ryc. 3 Zaburzenia proliferacji komórek i cyklów w niedoborze SMO. (A i B) Fibroblasty znakowano CFSE i DAPI i analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. Liczbę podziałów komórkowych określono na podstawie liczby pików fluorescencji CFSE. Liczbę komórek w fazach G0-G1 i S-G2-M cyklu komórkowego analizowano na podstawie ilości liniowej fluorescencji DAPI. (C) Histogramy pokazują typowe profile fluorescencji DAPI komórek w fazach G0-G1 i G2-SM cyklu komórkowego w normalnych ludzkich transformowanych limfoblastach EBV. Hodowanych w standardowej pożywce z 10% FBS; w pożywce zubożonej w cholesterol (CD); lub na CD z dodatkiem symwastatyny (ST), ATZ lub flukonazolu (FA). Dane kontrolne reprezentują 5 różnych normalnych linii komórkowych z różnymi pasażami. Stopień zmniejszenia podziału komórek był podobny we wszystkich kontrolach podczas wzrostu w pożywce zubożonej w cholesterol w porównaniu ze zwykłym podłożem. Fluorescencja jest wyrażana jako GMFI. Wszystkie przedstawione wartości GMFI mają solidne współczynniki zmienności mniejsze niż 1%. Dysfunkcja immunologiczna w niedoborze SMO. Pacjentka urodziła się z prawidłową skórą, a rozległe zmiany skórne nie rozwinęły się aż do wieku 6 lat, co sugeruje, że pierwotna dysfunkcja bariery prawdopodobnie nie była jedyną przyczyną jej stanu zapalnego skóry. Wiele wad cholesterologenezy wiąże się z objawami immunologicznymi, a skórka naszego pacjenta uległa krótkiej poprawie dzięki leczeniu cyklosporyną A; jednak później stała się oporna na leczenie, co sugeruje, że jej odpowiedź immunologiczna była nietypowa w porównaniu z innymi zaburzeniami szlaku cholesterolowego i powszechną łuszczycą. Dlatego zbadaliśmy panel parametrów immunologicznych u pacjenta i jej ojca, jak opisano w Tabelach metod i uzupełniających 1. Próbki krwi od 20 zdrowych osób badano jako kontrole. Wybrane wielokolorowe profile cytometrii przepływowej granulocytów i komórek T pokazano na Figurze 4A, a geometryczną średnią intensywność fluorescencji (GMFI) i procent komórek dla każdego pomiaru pokazano w Tabeli dodatkowej 2. Stwierdziliśmy, że aktywowane granulocyty CD16 + (identyfikowane przez CD25 +). Podklony CD69 + i CD86 + HLA-DR +) były zwiększone odpowiednio 30- i 20-krotnie u pacjenta i jej ojca w porównaniu ze zdrowymi kontrolami (Figura 4A i Tabela Uzupełniająca 2). CD86 i HLA-DR są markerami dla komórek prezentujących antygen. Co ciekawe, doniesiono, że blokowanie syntezy cholesterolu de novo za pomocą statyny może zapobiegać ekspresji tych markerów w dedykowanych komórkach prezentujących antygeny (16). Ponadto wystąpił 30- i 15-krotny wzrost liczby TLR-2 + TLR-4. granulocyty odpowiednio u pacjenta i jej ojca, w porównaniu ze zdrowymi kontrolami (Figura 4A). Regulację w górę TLR-2, ale nie TLR-4, uważa się za typową dla pacjentów z łuszczycą (17) lub łuszczycowym zapaleniem stawów (18), ale nie u osób z reumatoidalnym zapaleniem stawów. Nadekspresja TLR-2 i obniżenie poziomu TLR-4 w granulocytach prawdopodobnie odzwierciedla rozregulowanie odpowiedzi immunologicznej u pacjenta po normalnych zakażeniach bakteryjnych. Zgodnie z tą interpretacją ekspresja specyficznej dla granulocytów izoformy CD16b była również znacznie obniżona zarówno u pacjenta, jak i jej ojca (Figura 4B), co sugeruje defekt w funkcji fagocytarnej.
[hasła pokrewne: badania kontrolne po urlopie macierzyńskim, pompa insulinowa refundacja, centrum onkologii warszawa roentgena ]
[podobne: centrum onkologii warszawa roentgena, kamikadze, rak płaskonabłonkowy płuca ]