Utrata antagonisty BMP USAG-1 łagodzi choroby w mysim modelu postępującej dziedzicznej choroby nerek Zespół Alporta ad

Obserwacje w tym badaniu sugerują, że USAG-1 może przyczyniać się do patogenezy uszkodzenia nerek przez mechanizm, który uważamy za nowy, obejmujący przesłuch między plamką żółtą dystalnych kanalików i mezangium przynależnego kłębuszka nerkowego. Ponadto wykazujemy, że w nerce Col4a3. /. myszy, TGF-. sygnalizacja obejmuje fosforylację Smad1 / 5/8, czynniki transkrypcyjne klasycznie uważane za dalszy efekt sygnalizacji BMP. Continue reading „Utrata antagonisty BMP USAG-1 łagodzi choroby w mysim modelu postępującej dziedzicznej choroby nerek Zespół Alporta ad”

Utrata antagonisty BMP USAG-1 łagodzi choroby w mysim modelu postępującej dziedzicznej choroby nerek Zespół Alporta

Błona podstawna kłębuszkowa (GBM) jest kluczowym składnikiem jednostki filtrującej w nerce. Mutacje obejmujące dowolny z genów kolagenu IV (COL4A3, COL4A4 i COL4A5) wpływają na montaż GBM i powodują zespół Alport, postępującą dziedziczną chorobę nerek bez ostatecznej terapii. Wcześniej wykazaliśmy, że antagonista morfogenetyczny białka kości (BMP), związany z wrażliwością na macicę związaną z genem (USAG-1), negatywnie reguluje działanie ochronne BMP-7 w mysim modelu uszkodzenia rurki podczas ostrej niewydolności nerek. Tutaj badaliśmy rolę USAG-1 w czynności nerek w Col4a3. /. Continue reading „Utrata antagonisty BMP USAG-1 łagodzi choroby w mysim modelu postępującej dziedzicznej choroby nerek Zespół Alporta”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 9

Po 24 godzinach transfekcji komórki MLg hodowano w DMEM z lub bez all-trans RA (1 x 10. 6 M) przez dodatkowe 24 godziny. Aktywność lucyferazy i renilli analizowano za pomocą układu podwójnej lucyferazy (Promega), jak opisano wcześniej (44). ISH. WMISH przeprowadzono na 96-studzienkowych płytkach, jak opisano wcześniej (45). Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 9”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 8

Zarodki zostały odróżnione od ich miotów z cechami fenotypowymi i genotypowania PCR (7). Aktywację szlaku RA wykrywano za pomocą myszy reporterowych RARElacZ (31). Kanoniczna sygnalizacja Wnt została wykryta przy użyciu myszy reporterowej BATgal, reportera opartego na promotorze TCF-lacZ (15). Myszy Rarelh2 + /. RARElacZ wytworzono przez skrzyżowanie Raldh2 + /. Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 8”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 7

W mezodermie ścieżki te zbiegają się do Fgf10, który jest indukowany przez Wnt i hamowany przez Tgf. sygnalizacja. Zatem, działając na Wnt i Tgfc, RA ostatecznie dostraja poziomy i dystrybucję Fgf10 krytyczną dla inicjacji morfogenezy płuc. Znaczenie tego mechanizmu w kontrolowaniu powstawania zarodków jest dodatkowo potwierdzone przez powszechną indukcję Fgf10 i ektopowych pąków obserwowanych w płucach i sąsiadującym żołądku w naszych doświadczeniach z wykorzystaniem funkcji wzmocnienia Wnt (Figura 4, F. H). Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 7”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 6

Wydaje się, że w przypadku niedoboru RA aktywacja sygnalizacji Wnt może wywołać tylko tworzenie pączków pomimo dwustronnej ekspresji Fgf10. Zarówno aktywacja Wnt, jak i Tgf. hamowanie jest wymagane w celu ratowania powstawania pączków płucnych w przedrakach z niedoborem RA. Wcześniej donieśliśmy, że zakłócenie sygnalizacji RA powoduje hiperaktywację Tgf. droga w mezodermie przednim jelita. Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 6”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 5

Co ciekawe, analiza morfologii i ekspresji Nkx2-1 ujawniła obecność ektopowych pączków w zawiązku płucnym i sąsiadującym żołądku (7 z 11, Figura 4G). Efekt hiperaktywacji sygnalizacji Wnt w ekspresji Fgf10 i tworzeniu pączków zaobserwowano podobnie po wszczepieniu kulki nasiąkniętej Wnt3a w przedgrzyzieniu kontrolnym WT (Figura 4H i dane nie przedstawione). Figura 4 reguluje Fgf10 w przednim mezodermie. (A. C) WMISH Fgf10 wykazywał lokalną ekspresję w mezodermie związanej z pąkami płucnymi (A, groty strzałek). Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 5”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca czesc 4

Zastosowano dwa niezależne podejścia do zakłócenia sygnalizacji Wnt. Po pierwsze, przednie dziobki WT były leczone rekombinowanym mysim Dkk1, które wiąże się z receptorem Wnt Lrp5 / 6, co uniemożliwiało wiązanie się z Wnt (20). Alternatywnie, przedgry zostały poddane działaniu kwercetyny, flawonoidu, o którym wiadomo, że hamuje oddziaływanie pomiędzy Tcf i P-kateniną w jądrze (21). Prekursory płuc pochodzą z prymitywnego przedgrzybicy, jako grupa komórek endodermalnych tylnych do tarczycy, która eksprymuje homeoboks NK1 (Nkx2-1). Nkx2-1 jest najwcześniejszym znanym markerem losu komórek progenitorowych płuca, chociaż jest również wyrażany w tarczycy (22, 23). Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca czesc 4”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca cd

Zwiększenie poziomu Dkk1 nie było ograniczone do przypuszczalnego pola płuc, ale było konsekwentnie widoczne w tym miejscu (Figura 1, J. M, obszary pudełkowe). Dane silnie sugerują, że ekspresja Dkk1 jest regulowana przez endogenny RA podczas organogenezy przedniego jelita i że ta regulacja może być funkcjonalnie odpowiednia dla pojawiającego się primordium płucnego. Dkk1 jest bezpośrednim celem RA w komórkach mezenchymalnych płuc. Aby uzyskać wgląd w mechanizm, dzięki któremu RA wpływa na ekspresję Dkk1, badaliśmy potencjalny bezpośredni wpływ RA w transkrypcji genu. Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca cd”

Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad

W poprzedniej próbie zbadania molekularnych mechanizmów agenezji płuc, przeanalizowaliśmy globalne profile transkrypcyjne mysich zarodkowych przodków z farmakologicznego i genetycznego modelu niedoboru RA. Próbki z deficytem RA składały się z przednich wlotów E8.5 WT hodowanych przez 24 godziny z antagonistą receptora RA BMS493 (określanym w niniejszym dokumencie jako BMS) lub z wymazem E58 Raldh2 z zerami hodowanymi w pożywce kontrolnej; oba wykazywały agenezję płuc. Próbki dostatecznie RA były kontrolnymi WT lub Ruthh2-NULL, w których formowanie płuc zostało uratowane przez egzogenny RA (7. 9, 11). Spośród genów ulegających zróżnicowanej ekspresji odkryliśmy, że Dkk1, endogenny antagonista sygnalizacyjny Wnt, był znacząco podwyższony w niedoborach RA z obu modeli (model BMS, 3,5-krotny, P = 1,46 × 10. Continue reading „Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad”