Regulacyjna rola DR4 w spontanicznym modelu transgenicznym cukrzycy DQ8 ad 5

Wszyscy biorcy, z wyjątkiem jednego (który otrzymał komórki BM DQ8 + DR4 + / mII P / RIP-BM7), byli wolni od cukrzycy w 8-tygodniowym okresie obserwacji. Rekonstytucja przebiegła pomyślnie i była stabilna, jak określono przez ekspresję odpowiednich ludzkich cząsteczek MHC klasy II na komórkach B220 + u ludzkich odbiorców ujemnych względem MHC klasy II (Figura 4a) i przez dodatnio wybrane dojrzałe splenocyty CD4 lub CD8 (Figura 4a). Kiedy jednak przeanalizowaliśmy trzustki u odbiorców, ujawniono inny obraz. Chociaż zapalenie ucha stwierdzono u wszystkich biorców, ciężkość zapalenia wyrostka robaczkowego była różna: zapalenie wyrostka w myszach DQ8 + / mllp / RIP-B7.1 i DQ8 + DR4 + / mIIa / RIP-B7.1 było podobne i znacznie większe niż w DR4 + / mII. / RIP-B7.1 (Figura 4b). Interesujące jest, że jedyny biorca, u którego rozwinęła się cukrzyca w momencie zakończenia eksperymentu, wykazywał infiltrację zarówno w wysepkach, jak i tkance zewnątrzwydzielniczej (dane nie przedstawione). Ta sama kohorta eksperymentów została powtórzona z użyciem komórek BM zubożonych w CD3C i uzyskano bardzo podobne wyniki. Wskazuje to, że komórki T infiltrujące do wysepek są bardziej prawdopodobne niż pochodzą z komórek macierzystych BM, a nie 0,5. 1% komórek CD3 + w nieleczonych BM. Chimery BM również wytworzono przy użyciu BM pochodzącego od myszy mllp / RIP-B7.1 lub DQ6 + / mIIa / RIP-B7.1 jako kontroli i żadna z chimer w grupach kontrolnych nie rozwinęła zapalenie ucha po zakończeniu eksperymentu (8). tygodnie, dane nie przedstawione). Figura 4 (a) Ekspresja transgenów HLA i selekcja komórek T CD4 + w chimerach BM. W górnym panelu limfocyty wyizolowane ze śledziony trzech typów chimer (jak wskazano) wybarwiono markerem komórek B B220 (PE) w połączeniu z anty-HLA-DQ (FITC) lub DR (FITC). W dolnym panelu te same splenocyty wybarwiono anty-CD4 (PE) i anty-CD8 (FITC). (b) Barwienie immunohistochemiczne fragmentów trzustkowych chimer BM. W górnym panelu znajduje się chimera DQ8 + / mII. / RIP-B7 BM. Chimera DR4 + / mII. / RIP-B7 BM znajduje się w środkowym panelu. Na dolnym panelu pokazano chimerę DQ8 + DR4 + / mIIa / RIP-B7 BM. Nacieki wysepek barwiono na limfocyty T CD4 + (po lewej), limfocyty T CD8 + (środkowe) i B220 + B (po prawej). Spontaniczna GAD i reaktywność insuliny u myszy DQ8 + DR4 + / mIIa / RIP-B7.1. W naszych ostatnich badaniach wykazaliśmy, że splenocyty cukrzycowe myszy DQ8 + / mIIa / RIP.B7-1 reagowały na wysepki i przypuszczalne autoantygeny GAD i / lub insulinę (34). Tej reaktywności towarzyszyło wytwarzanie IFN-y, ale nie IL-4 (34). Aby zbadać, czy mała częstość spontanicznej cukrzycy obserwowanej u myszy DQ8 + DR4 + / mIIa / RIP-B7.1 była spowodowana utratą tej autoreaktywności ograniczonej do DQ8, przeprowadziliśmy testy proliferacji in vitro z użyciem oczyszczonych limfocytów T CD4 + ze splenocytów bez cukrzycy (Figura 5) i cukrzycowej (dane nie pokazano) myszy DQ8 + DR4 + / mIIa / RIP-B7.1. Komórki T CD4 + od myszy DR4 + / mIIa / RIP-B7.1 wykazywały umiarkowaną odpowiedź na GAD i insulinę (odpowiednio 1400 i 1260 cpm, ponad 470 cpm w nieobecności Ags), podczas gdy komórki T CD4 + od DQ8 + / Myszy mIIa / RIP-B7.1 wykazały podobne wyniki (chociaż niższy poziom w porównaniu z osobnikami z cukrzycą, dane nie pokazane) z naszego poprzedniego badania (34). Wprowadzenie DR4 do myszy DQ8 + / mIIa / RIP.B7-1 (mianowicie myszy DQ8 + DR4 + / mIIa / RIP-B7.1) nie zniosło reaktywności autoantygenu w wysepce (Figura 5). Co więcej, odpowiedzi były ograniczone zarówno do DQ8 i DR4, jak pokazano w teście hamowania Ab (Figura 5, aib). Eksperymenty blokujące powtórzono przy kolejnych dwóch okazjach z podobnymi wynikami (dane nie pokazane). Jednakże profil cytokin wytwarzanych przez autoantygeny wysepek u myszy eksprymujących DQ8 i DR4 był różny od profilu obserwowanego u myszy DQ8 + / mII y / RIP.B7-1, a mianowicie supresji IFN-y. i wytwarzanie IL4, chociaż na niskich poziomach (Figura 6a). Figura 5 Proliferacja in vitro komórek T pochodzących ze śledziony cukrzycowej na wysepkowe autoantygeny komórek. GAD i insulinę (Ins). (a) Oczyszczone komórki T (2 x 105 / studzienkę) hodowano w pożywce (pożywka Click zawierająca 5% dezaktywowanej termicznie FCS) samodzielnie lub z ag (jak wskazano) w obecności napromieniowanych (nieprzyjemnych) splenocytów jako komórki prezentujące Ag. (b) Ograniczenie HLA odpowiedzi proliferacyjnej również testowano w testach przez dodanie supernatantów mAbs do DR (HB55) i DQ (HB144). Nieistotną kontrolą Ab stosowaną w testach była anty-IAb (Y3JP). Hodowle pulsowano 0,5 Ci 3H po 72 godzinach. Figura 6 Produkcja cytokin przez limfocyty T CD4 + po stymulacji GAD (a) i anty-CD3 (b). Oczyszczone komórki CD4 + (2 x 106 / ml) ze śledzion myszy bez cukrzycy, jak wskazano, hodowano z białkiem GAD lub anty-CD3 (supernatant 2C11) w obecności napromieniowanych splenocytów przez odpowiednio 72 i 48 godzin.
[przypisy: pompa insulinowa refundacja, szczepionki na meningokoki, profilaktin koncentracja ]
[podobne: ból piszczeli po bieganiu, witamina c lewoskrętna wikipedia, osocze bogatopłytkowe opinie ]