Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 5

Co ciekawe, analiza morfologii i ekspresji Nkx2-1 ujawniła obecność ektopowych pączków w zawiązku płucnym i sąsiadującym żołądku (7 z 11, Figura 4G). Efekt hiperaktywacji sygnalizacji Wnt w ekspresji Fgf10 i tworzeniu pączków zaobserwowano podobnie po wszczepieniu kulki nasiąkniętej Wnt3a w przedgrzyzieniu kontrolnym WT (Figura 4H i dane nie przedstawione). Figura 4 reguluje Fgf10 w przednim mezodermie. (A. C) WMISH Fgf10 wykazywał lokalną ekspresję w mezodermie związanej z pąkami płucnymi (A, groty strzałek). Hamowanie Dkk1 sygnalizacji Wnt zniosło Fgf10 w przyszłym polu płucnym (B, gwiazdka, powiększenie po prawej), efekt uderzająco podobny do działania BMS w przednim jelicie (C, gwiazdka). (D) Hiperaktywacja Wnt przez inhibitor Gsk3b (Gski) spowodowała rozległą aktywność LacZ w przedżołądkach BATgal (czerwone groty strzał). (E) Real-time PCR ujawnił regulację w górę Axin2 i Lef1 w 24-godzinnym hodowlanym przedrodzie potraktowanym inhibitorem Gsk3b lub Wnt3a. * P <0,05 względem kontroli. (F) WMIS z przedramienia potraktowanego inhibitorem Gsk3b ., wykazującym silniejsze i szersze sygnały Fgf10 (żółte groty strzałek) w porównaniu z kontrolą (A). (G i H) WMIS z Nkx2-1 w potraktowanych GK3b inhibitorach (G) lub w perełkach Wnt3a z wszczepionymi paskami (H) WT wykazało ektopowe pąki w płucach i żołądku (żółte groty strzałek). Pasek skali: 300 .m (B, prawo, C i G). Aktywator Wnt lub FGF10 ratuje wywołaną przez Dkk1 agenezę płuc w przedrodzonach z wystarczającą ilością RA. Aby sprawdzić, czy przerwanie morfogenezy płuc za pośrednictwem Dkk1 jest spowodowane przez niewystarczającą miejscową aktywację sygnalizacji Wnt, zapewniliśmy egzogenny rekombinowany Wnt3a na kulkach do przedrzuconych WT potraktowanych Dkk1. Pęczek nasiąknięty Wnt3a umożliwił tworzenie obu pączków płucnych w obecności egzogennej Dkk1 (5 z 5), podczas gdy pule kontrolne nasączone PBS nie zawierały (7 z 7), co wykazano na podstawie morfologii i ekspresji Nkx2-1 (Figura 5, ACHC). W podobny sposób hamowano agenezję płuc zależną od Dkk1 przez indukcję endogennego kanonowego przekazywania sygnałów przez Wnt przy użyciu inhibitora Gsk3b (4 na 4, Figura 5D). Fig. 5 Nie pozwala na poprawę agenezji płuc u pacjentów z Dkk1 i niedoborem RZS. (A. D) Wszczepienie perełek nasączonych w Wnt3a, ale nie PBS, uratowało pąki obustronnie w obornikach potraktowanych Dkk1 (A. C), co potwierdziła silna ekspresja Nkx2-1 (groty strzałek). Obustronne uratowanie obserwowano także, gdy inhibitor Gsk3b dodano do potraktowanych Dkk1 przodków (D). (E i F) Egzogenne pofragmentowane FGF10 (F10) pączki wyrażające Nkx2-1 (strzałki) w obornikach potraktowanych Dkk1 (E), reakcja podobnie wywołana w przedrakach traktowanych BMS (F). (G. P) Wszczepienie kulek Wnt3a w podeszwy poddane działaniu BMS wywołało tylko pączek płuca, znakowany przez Nkx2-1 (G i H, groty strzałek), chociaż aktywność BATgal (I) i ekspresja Fgf10 (J) były wyraźnie obecne zarówno na boki endodermy płucnej (strzałki). Podobne fenotypy zaobserwowano w przedrodzinach leczonych jednocześnie z BMS i inhibitorem Gsk3b (KłN) oraz w Raldh2a / r. przedroki traktowane kulkami Wnt3a (O (P)). Czerwone gwiazdki wskazują miejsca jednostronnej agenezji pączków. Oryginalne powiększenie, × 10 (A, B, D. G, I. K, i M. P); × 20 (C, H i L). Stwierdziliśmy, że niezdolność do wywoływania Fgf10 w obecności Dkk1 była głównym powodem niepowodzenia w tworzeniu pączków płucnych. Wyściółki potraktowane Dkk1, w których wszczepiono kulki z FGF10, wykazały wzrost pączków i ekspresję Nkx2.1 w nabłonku związanym z perełką (3 z 3; Figura 5E). Odpowiedź na FGF10 była podobna do odpowiedzi w obornikach potraktowanych BMS (6 z 7, Figura 5F). Na podstawie tych danych stwierdziliśmy, że utrata sygnalizacji Wnt, nawet w obecności normalnych poziomów RA, zapobiega miejscowej indukcji Fgf10 i zaburza tworzenie płuc. Jednakże, udało się temu zapobiec całkowicie poprzez dostarczenie egzogennego Wnt lub indukcję endogennej ścieżki Wnt. Tworzenie płuc jest tylko częściowo uratowane przez aktywację sygnalizacji Wnt na tle niedoboru RA. Następnie sprawdziliśmy, czy zapobieganie obniżeniu sygnału Wnt w przypadku przedrzuconych RZS może uratować agenezję płuc. Hodowaliśmy eksplantaty przedklinowe w obecności antagonisty RA BMS i kulki nasączonej Wnt3a (400 ng / ml). Co zaskakujące, tylko jeden pączek został wywołany w polu płuc, co potwierdza silna lokalna ekspresja Nkx2-1 (11 z 11). Było to zastanawiające, ponieważ ocena ekspresji BATgal i Fgf10 wykazywała sygnały o pozornie jednakowej intensywności po obu stronach przyszłej endodermy płucnej, zgodnie z ratunkiem dwustronnym (3 z 3, Figura 5, G. J). Obustronna ekspresja Fgf10 była również widoczna w przedrodzinach z Raldh2 zerowanych hodowanych z kulką Wnt3a (3 z 3, Figura 5, O i P). Rozbieżność między jednostronnym uwalnianiem pączka płuca a obustronną indukcją BATgal i Fgf10 była podobnie obserwowana, gdy dostarczono inhibitor Gsk3b, zamiast Wnt3a, w połączeniu z BMS (5 z 5, Figura 5, K. N) [patrz też: balsam kapucyński ulotka, niedobór witaminy d3 objawy u dorosłych, badania kontrolne po urlopie macierzyńskim ] [hasła pokrewne: badania kontrolne po urlopie macierzyńskim, laserowe wybielanie zębów cena, szczepionki na meningokoki ]