Sieć zależna od kwasu retinowego w przednim obiegu kontroluje tworzenie mysiego płuca ad 9

Po 24 godzinach transfekcji komórki MLg hodowano w DMEM z lub bez all-trans RA (1 x 10. 6 M) przez dodatkowe 24 godziny. Aktywność lucyferazy i renilli analizowano za pomocą układu podwójnej lucyferazy (Promega), jak opisano wcześniej (44). ISH. WMISH przeprowadzono na 96-studzienkowych płytkach, jak opisano wcześniej (45). Pokrótce, wytworzono i namnożono ribosfory znakowane digoksygeniną (znakowane DIG) (Maxiscript Kit, Ambion) z cDNA genów będących przedmiotem zainteresowania. Próbki były ponownie uwodnione; trawione proteinazą K (Applied Biosystems); prehybrydyzowany (2 godziny w 70 ° C) w buforze zawierającym 50% formamid, 5 x SSC, 1% SDS, 50 mg / ml drożdżowego RNA i heparynę; hybrydyzowano przez noc z sondami RNA znakowanymi DIG; i inkubowano przez noc z koniugatem anty-DIG-alkaliczna fosfataza (Roche Applied Sciences) w 4 ° C. Sygnały były wizualizowane przy użyciu substratu fioletowego BM (Roche Applied Sciences). ISH przeprowadzono również w 10. M zamrożonych przekrojów w sposób podobny do tego opisanego wcześniej (46). W niektórych punktach immunobarwienie dla Sox2 (1: 400; Millipore) przeprowadzono stosując zestaw ABC (Vector Laboratories) zgodnie z protokołem producenta. Wnioski oparto na ocenie co najmniej 3 niezależnych próbek na sondę na stan. Statystyka. Istotność różnic określono za pomocą dwustronnego testu ucznia (n = 3 na stan, o ile nie zaznaczono inaczej). Wartość AP mniejsza niż 0,05 została uznana za znaczącą. Materiały uzupełniające Zobacz Dodatkowe dane Podziękowania Dziękuję Jining Lu i George owi O Connorowi za pomocne dyskusje i Anne Hinds za pomoc w histologii. Praca ta była wspierana przez granty National Heart, Lung and Blood Institute, NIH (R01-HL67129, R01-HL081800 i P01-HL47049) oraz nagrodę GlaxoSmithKline Pulmonary Fellowship Award. Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Cytat za ten artykuł: J Clin Invest. 2010; 120 (6): 2040. 2048. doi: 10.1172 / JCI40253.
[hasła pokrewne: polana szymoszkowa basen, laserowe wybielanie zębów cena, paznokcie w kształcie migdałów ]
[patrz też: niedobór witaminy d3 objawy u dorosłych, przygotowanie do rektoskopii, centrum onkologii warszawa roentgena ]