Staphylococcus aureus aktywuje sygnalizację IFN typu I u myszy i ludzi poprzez powtórzone sekwencje Xr białka A ad 5

Indukcja IL-6 jest wyrażana jako procent tej indukowanej przez SpA Xr w komórkach myszy WT. (A i B) Dane przedstawiają średnią i SD z 3 dołków z reprezentatywnego eksperymentu na 3. * P <0,05; ** P <0,001, test studenta przeprowadzony na surowych danych. Immunoblots demonstrujące fosforylację STAT3 w komórkach dróg oddechowych od Stat1. /. myszy i hamowanie w obecności inhibitora STAT3 przedstawiono w B. Aby dalej udokumentować, że IFN-y sygnalizacja zachodzi in vivo w odpowiedzi na infekcję gronkowcową, wykazaliśmy fosforylację STAT1 i STAT3 w lizatach płucnych od myszy donosowo inokulowanych albo szczepem Neweus aureus S. lub samym peptydem SpA Xr (Figura 5A). Fosforylacja STAT3 w Ser727 była również aktywowana in vivo u myszy zakażonych WT S. aureus, ale nie w przypadku mutanta białkowego Aull (Suplementowa Figura 3). MRNA dla IL-6 był znacząco zwiększony u myszy leczonych SpA Xr i był skorelowany z rekrutacją PMN do płuc. Zarówno mRNA IL-6 jak i PMN uległy zmniejszeniu u myszy leczonych inhibitorem pan-JAK (Figura 5B). Myszy leczone inhibitorem JAK przed i podczas zakażenia S. aureus miały znacznie mniejszą produkcję IL-6 niż zwierzęta traktowane podłożem (Figura 5C). Okazało się również, że inhibitor JAK wpływa na klirens bakteryjny i rekrutację PMN, ale efekty nie były statystycznie istotne (fig. 5C). Figura 5SpA Xr aktywuje STAT1 / 3 in vivo. (A) Myszy C57BL / 6 inokulowano donosowo SpA Xr, S. aureus lub PBS (kontrola). 4 godziny później, p-STAT1 (Tyr701), p-STAT3 (Tyr705) i (3-aktynę wykrywano w lizatach płuc za pomocą immunoblot. Dane od 2 reprezentatywnych myszy na 6 są pokazane dla kwadrantów kwadrupch i kwadrantu prawego dolnego. Dane od 2 reprezentatywnych myszy na 3 są pokazane w prawym górnym kwadrancie. Cienka pionowa linia między pasmami w grupie wskazuje dane splicowane z oryginalnego blotu. (B) mRNA dla IL-6 w płucu myszy leczonych SpA Xr3 wykrywano metodą PCR w czasie rzeczywistym, a odsetek PMN wśród całkowitych leukocytów w płucach określano za pomocą cytometrii przepływowej po donosowej inokulacji SpA Xr w nietraktowanej lub JAK myszy leczone inhibitorem (Inh). Każda kropka reprezentuje pojedynczą mysz, a poziome linie pokazują medianę w każdej grupie. (C) mRNA IL-6 w płucu myszy zakażonych S. aureus p wykrywano metodą PCR w czasie rzeczywistym. Pokazano średnie wartości procentowe PMN odpowiadających tym myszom. Omówienie Badania te wskazują, że pozakomórkowe bakterie Gram-dodatnie aktywują kaskadę IFN typu I skutecznie i że przyczynia się to do zachorowalności i śmiertelności związanej z infekcją dróg oddechowych S. aureus. Białko A, już ustalone jako główny czynnik wirulencji w patogenezie zapalenia płuc, ze względu na jego zdolność do aktywowania przekazywania sygnałów przez TNF (7), wydaje się również krytyczne w aktywacji IFN-y. Wcześniej wykazano, że białko A indukuje IFN typu I w limfocytach (29). Domena Xr SpA, która składa się z wielu powtórzeń 24-bp zachowanych w wysokim stopniu peptydów, wydaje się być zarówno niezbędna, jak i wystarczająca dla IFN-y. aktywacja w komórkach nabłonka dróg oddechowych. Ponieważ białko A jest obficie zrzucane z powierzchni rosnących gronkowców, wydaje się wysoce prawdopodobne, że to białko, nawet przy braku nienaruszonych organizmów, jest wystarczające do aktywacji nabłonkowej błony śluzowej. Ma to szczególne znaczenie w płucach, gdzie miejscowe pęcherzykowe makrofagi nie wytwarzają bioaktywnego IFN-y. (30). Zwróć uwagę, że indukcja IFN-y jest dodatkiem do innych funkcji SpA, takich jak wiązanie IgG-Fc, które opóźnia opsonizację, wiąże czynnik von Willebranda (31) i aktywację TNFR1 i EGFR, z których wszystkie zostały zmapowane do N-końcowego regionu wiążącego IgG ( 8). Wiele szczegółów IFN-y aktywowanego przez SpA kaskada sygnalizacyjna pozostaje do zdefiniowania. Podczas gdy wykazujemy zależną od dynaminy endocytozę SpA i zaangażowanie adaptera TRIF, należy zidentyfikować specyficzny receptor wewnątrzkomórkowy, być może TLR. Dalszy komponent typowego IFN-a kaskada, którą uprzednio wykazano jako aktywowana przez LPS, jest podobnie stymulowana przez S. aureus. Podczas gdy aktywacja STAT3 wydaje się być niezależna od kaskady zainicjowanej przez IFN-y, jest wymagana dla dalszych efektów indukowanego przez IFN – y STAT1, takiego jak wytwarzanie IL-6. Sygnalizacja IFN typu I wydaje się odgrywać istotną rolę w patogenezie zapalenia płuc gronkowcowego: Ifnar. /. myszy znacznie zwiększyły przeżycie w porównaniu z myszami WT zakażonymi S. aureus USA300. Jak wykazano w mysich modelach wirusowej infekcji dróg oddechowych, silna stymulacja IFN typu I powoduje znaczną utratę komórek CD11c + z płuc i wydaje się odgrywać istotną rolę w immunoregulacji w drogach oddechowych (32, 33).
[przypisy: paznokcie w kształcie migdałów, przygotowanie do rektoskopii, pompa insulinowa refundacja ]
[patrz też: pompa insulinowa refundacja, depilacja laserowa twarzy, badania kontrolne po urlopie macierzyńskim ]