Staphylococcus aureus aktywuje sygnalizację IFN typu I u myszy i ludzi poprzez powtórzone sekwencje Xr białka A ad 6

Myszy WT miały znacząco więcej TNF-a w ich drogach oddechowych niż Ifnar. /. myszy, a wcześniej wykazaliśmy, że TNF-a sygnalizacja jest związana ze znaczną patologią płuc w odpowiedzi na S. aureus (7). Nieoczekiwanie, ani nagromadzanie PMN w drogach oddechowych, ani sepsa nie były związane ze zwiększoną śmiertelnością myszy WT. Kilka raportów udokumentowało, że DC i makrofagi są bardzo wrażliwe na działanie IFN typu I. Zgodnie z naszymi odkryciami, w przypadku braku IFN typu I, rekrutowane DC są zatrzymywane w płucu (34) i nie ma zdolności do stymulowania makrofagów do wydzielania TNF-a. (35). Dokładnie jaki składnik IFN-y Kaskada aktywowana przez S. aureus jest bezpośrednio odpowiedzialna za zwiększoną śmiertelność obserwowaną w modelu myszy, która nie jest jeszcze znana, ale może stanowić cel interwencji terapeutycznej. Główna rola IFN typu I w obronie gospodarza przed infekcją wirusową została dobrze udokumentowana i bierze udział w patogenezie kilku infekcji bakteryjnych (16, 23, 36). Wiele konsekwencji tej kaskady i jej znaczenie w łączeniu wrodzonej i adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej są przedmiotem licznych przeglądów (12, 22). Dokładny sposób, w jaki produkty bakteryjne aktywują sygnalizację typu I, pozostaje ustalony dla większości patogenów. Nie jest również jasne, czy odpowiedzi IFN typu I są korzystne dla gospodarza lub patogenu. Sygnalizacja TLR4 inicjowana przez LPS jest wyraźnie głównym aktywatorem IFN typu I; oba IFN-y a myszy pozbawione Tyk2 są oporne na endotoksemię (21). W przypadku Bacillus anthracis sygnalizacja IFN typu I również wydaje się przekazywać odpowiedź ochronną gospodarzowi. W przypadku innych patogenów Gram-dodatnich, paciorkowców Streptococcus pneumoniae i grupy B indukcja sygnalizacji typu I była ważna dla usuwania bakterii, a w tych badaniach, w przeciwieństwie do naszych wyników, Ifnar. /. myszy miały uporczywą bakteriemię i nie były w stanie kontrolować infekcji (35). Nowsze badania sugerują, że DNA streptokoków grupy B jest odpowiedzialne za indukcję IFN typu I w mysich makrofagach, chociaż bliższe części tego układu sygnałowego i specyficznych receptorów nie zostały jeszcze zidentyfikowane (36). Nasze dane wskazują, że S. aureus podobnie aktywuje IFN typu I i że ma to szkodliwy wpływ na zdolność gospodarza do radzenia sobie z infekcją płucną S. aureus. Lokalna indukcja IFN typu I w odpowiedzi na grypę może stworzyć środowisko sprzyjające nadkażeniu gronkowców, która jest główną przyczyną śmiertelności po przebytym prąciu (37). Podczas gdy nie zidentyfikowano wszystkich składników szlaku, zaangażowane jest ligand A ausus S., który oddziałuje z kilkoma receptorami eukariotycznymi. Ponadto heterogenny region Xr lub SSR białka A jest wymagany do aktywacji IFN typu I. Ponieważ region Xr jest miejscem aktywnej mutacji, kusi spekulować, że bodziec do delecji i powielania w domenie Xr jest w pewnym stopniu związany z ciśnieniem immunologicznym wywieranym przez efektory IFN typu I. Aktywacja IFN typu I w płucach zwiększa podatność na zakażenie S. aureus, a ten dobrze scharakteryzowany szlak mógłby dostarczyć atrakcyjnego celu w terapii immunomodulacyjnej zapalenia płuc. Metody Bakterie i rekombinowane białka. S. aureus 6390, USA300, i izolaty kliniczne hodowano w bulionie Casamino Acids. Drożdżowy wyciąg. Glicerofosforan (CYGP) i E. coli hodowano w bulionie Luria-Bertaini (LB). Mutant delecyjny spa został wygenerowany z delecją w ramce docelowego genu przez alleliczne zastąpienie, przy użyciu wrażliwego na temperaturę plazmidu pMAD. USA300 jest odporny na erytromycynę; dlatego zbudowaliśmy zmodyfikowany wektor pMAD poprzez klonowanie genu oporności na kanamycynę z pFOU do miejsca NaeI pMAD. W skrócie, około kb produktów PCR w górę i w dół od docelowych sekwencji wygenerowano i poddano ligacji przez splicing genu przez wydłużenie zachodzące na siebie. Otrzymany produkt o 2 kb strawiono, oczyszczono na żelu, wklonowano do pMAD z zastosowaniem tych samych miejsc restrykcyjnych i transformowano do E. coli. Przeprowadzono PCR z kolonii na transformantach E. coli. Plazmidy z pozytywnych klonów zweryfikowano przez analizę trawienia, a następnie zastosowano do transformacji S. aureus RN4220, selekcjonując odporne na kanamycynę i niebieskie kolonie w temperaturze 30 ° C. Plazmid z RN4220 zsekwencjonowano i zastosowano do transformacji szczepu S. aureus USA300, dla którego gen miał być usunięty. Proces allelicznego zastąpienia został opisany wcześniej (38). Delecja chromosomowa została zweryfikowana przez PCR i sekwencjonowanie DNA. Uzyskany szczep delecyjny pozbawiony był całej sekwencji białka A i wykazywał charakterystyki wzrostu podobne do szczepu rodzicielskiego. Spa o pełnej długości i fragment kodujący C-końcowy region SpA (SpA Xr) od S.
[podobne: pompa insulinowa refundacja, przygotowanie do rektoskopii, laserowe wybielanie zębów cena ]
[podobne: laserowe wybielanie zębów cena, szczepionki na meningokoki, polana szymoszkowa basen ]