Supresor sygnalizacji a1 (SOCS1) cytokiny jest nowym celem terapeutycznym dla indukowanego przez enterowirusa uszkodzenia serca ad 6

SOCS1 znakowany Myc lub SOCS3 ulegał ekspresji w kardiomiocytach szczurzych noworodków z zastosowaniem rekombinowanych wektorów adenowirusowych (20) (odpowiednio czarne lub szare paski). Wektor zawierający gen LacZ zastosowano jako kontrolę infekcji wektorowej adenowirusa (białe słupki). Po transdukcji wektorami adenowirusowymi komórki stymulowano IFN-a, IFN-a lub CT-1 przez 24 godziny. Komórki następnie infekowano CVB3 (+) lub utrzymywano bez wirusa (.) Przez kolejne 30 godzin. Liczbę komórek, które pozostały na płytce po infekcji CVB3, określono ilościowo i podano jako procent komórek w studzienkach niezakażonych CVB3. Dane pochodzą z pięciu niezależnych eksperymentów i są wyrażone jako średnie. SE. * P <0,01 dla porównania z komórkami transdukowanymi lacZ adenowirusa, stymulowanymi cytokinami i zakażonymi CVB3. ** P <0,01 dla porównania z komórkami transdukowanymi lacZ adenowirusa, nie stymulowane cytokinami i zakażone CVB3. (b) Myocyty inkubowano z adenowirusowym LacZ, adenowirusowym SOCS1 lub adenowirusowym SOCS3, zubożoną surowicę przez 24 godziny, a następnie stymulowano 1000 ng / ml IFN-y. przez 5 godzin lub nM CT-1 przez 10 minut. Sporządzono całkowite ekstrakty komórkowe i wysiano je przeciwciałami fosfo-STAT1, STAT1, fosfo-STAT3 i STAT3. Ekspresję SOCS1 i SOCS3 potwierdzono przeciwciałem anty-Myc. Przedstawiono reprezentatywne bloty Western z trzech niezależnych eksperymentów. SOCS1, adenowirus zawierający gen SOCS1 znakowany Myc; SOCS3, adenowirus zawierający gen SOCS3 znakowany Myc; LacZ, adenowirus zawierający LacZ; Stymować, stymulować, P-STAT1, fosfo-STAT1; P-STAT3, fosfo-STAT3. Zwiększenie indukowanej przez cytokiny aktywacji JAK-STAT przez dnSOCS1 w kardiomiocytach. Ostatnio Hanada i in. wykazali, że dnSOCS1, który ma mutację punktową (F59D) w funkcjonalnie krytycznym regionie hamującym kinazę SOCS1, silnie zwiększa zależną od cytokin zależność JAK-STAT zarówno in vivo, jak i in vitro (33). Autorzy zidentyfikowali degradację SOCS1 w tymocytach otrzymanych z myszy transgenicznych, które eksprymowały dnSOCS1 w sposób specyficzny dla limfocytu T, prowadząc do indukowanej przez cytokiny hiperaktywacji JAK i STAT oraz hiperproliferacji limfocytów T. Aby zdefiniować funkcję dnSOCS1 w kardiomiocytach, przeprowadzono test reportera STAT3. Plazmid AAV-dnSOCS1 znacznie zwiększył aktywność STAT3 indukowaną przez CT-1 (3 w porównaniu z plazmidem wahadłowym AAV (Figura 5a). Plazmid AAV-dnSOCS1 nie wpływał na aktywację NF-kB zależną od martwicy nowotworu. Co ważne, plazmid AAV-dnSOCS1 znacznie przezwyciężył hamowanie indukowanej przez CT-1 p aktywacji STAT3 przez SOCS1 (Figura 5b). Następnie, badaliśmy wpływ dnSOCS1 na indukowaną przez IFN -. Fosforylację STAT1 i indukowaną przez CT-1 (3 fosforylację STAT3 przy użyciu tego adenowirusa dnSOCS1 i kardiomiocytów. Jak pokazano na Figurze 5c, fosforylacja STAT w kardiomiocytach eksprymujących dnSOCS1 była dłuższa niż w kardiomiocytach eksprymujących LacZ. Dane te wskazują, że ektopowa ekspresja dnSOCS1 w kardiomiocytach wzmaga odpowiedź na cytokiny poprzez hamowanie SOCS1. Figura 5 Wspomaganie szlaku JAK / STAT przez dnSOCS1 w miocytach sercowych. (a i b) Cardiomyocyty transfekowano mieszaniną plazmidu zawierającą gen reporterowy APRE-lucyferaza (200 ng), gen reporterowy NF-kB-lucyferazy (200 ng), gen (3-galaktozydazy (100 ng), AAV plazmid wahadłowy lub wskazane stężenia plazmidu dnSOCS1. Po transfekcji komórki inkubowano w obecności lub pod nieobecność nM CT-1 lub 20 ng / ml TNF-a. przez 6 godzin i przygotowano ekstrakty komórkowe. Przedstawiono dane znormalizowane za pomocą aktywności p-galaktozydazy. Eksperymenty powtórzono trzy razy. Wyniki wyrażono jako średnie. SD. * P <0,01 dla porównania CT-1 z promieniem AAV. ** P <0,01 dla porównania CT-1 z pcDNA3-SOCS1. (c) Przebieg w czasie indukowanej przez IFN - y aktywacji STAT1 i indukowanej CT-1 (3 STAT3 w miocytach sercowych. Myocyty traktowano adenowirusem LacZ lub adenowirusem dnSOCSl, zubożono w surowicy przez 24 godziny, a następnie stymulowano je za pomocą 1000 ng / ml IFN-y. lub nM CT-1 odpowiednio przez wskazany okres. Sporządzono całkowite ekstrakty komórkowe i wysiano je przeciwciałami fosfo-STAT1, STAT1, fosfo-STAT3 i STAT3. Ekspresję dnSOCS1 potwierdzono przeciwciałem anty-Myc. Przedstawiono dane z jednego eksperymentu; dwa dodatkowe eksperymenty dały porównywalne wyniki. P-STAT1, fosfo-STAT1; P-STAT3, fosfo-STAT3; APRE, element odpowiedzi ostrej fazy. Hamowanie wywołanego wirusem uszkodzenia serca poprzez hamowanie SOCS. Ponieważ infekcja CVB3 indukuje zarówno SOCS1, jak i SOCS3, możliwe jest, że jeśli SOCS1 i SOCS3 mogą być hamowane w sercu, to aktywacja sygnalizacji JAK-STAT przez endogenne cytokiny może być w stanie bardziej skutecznie hamować replikację wirusa. [hasła pokrewne: witamina c lewoskrętna wikipedia, tomaszowskie centrum zdrowia, balsam kapucyński ulotka ] [hasła pokrewne: odchudzanie roku vita slim opinie, balsam kapucyński ulotka, pompa insulinowa refundacja ]