Supresor sygnalizacji a1 (SOCS1) cytokiny jest nowym celem terapeutycznym dla indukowanego przez enterowirusa uszkodzenia serca cd

We wszystkich testach reporterowych, do transfekcji użyto 0,5 x 106 kardiomiocytów powleczonych na sześcio-studzienkowych szalkach za pomocą odczynnika Lipofectamine PLUS (Invitrogen Corp., San Diego, California, USA). Bezpośredni zastrzyk AAV do serca. Myszy znieczulono domięśniowo mieszaniną ketaminy (100 mg / kg) i ksylazyny (5 mg / kg), a następnie nacięcia ściany brzucha. Po podniesieniu procesu wyrostka mieczykowatego, roztwory wektorowe (1011 kopii genomu na mililitr) wstrzyknięto do serca przez przeponę za pomocą 2 ml strzykawki insuliny z igłą 28 G (20 .l na jedno wstrzyknięcie). Po iniekcji skórę i otrzewną zamykano szwem ciągłym. Analiza statystyczna. Wyniki miana wirusa, test zakażenia in vitro, test z lucyferazą i echokardiografię wyrażono jako średnie. SE. Istotność statystyczną oceniano stosując niesparowany test Studenta dla porównań między dwoma sposobami. Poprawiono Bonferroniego dla wielokrotnych porównań. Dla wskaźnika przeżycia po zaszczepieniu CVB3 różnice między dwiema grupami analizowano za pomocą testu log-rank (Mantel-Cox). Wartości P mniejsze niż 0,05 uznano za statystycznie istotne. Wyniki Korelacja wywołanego wirusem uszkodzenia serca i aktywacja JAK-STAT. W celu określenia, czy szlak JAK-STAT jest zmieniony w sercach zakażonych CVB3, 4-tygodniowe myszy Balb / c typu dzikiego wstrzyknięto dootrzewnowo 103 PFU z CVB3. Ekstrakty białkowe z serca analizowano w dniach 1. 3 po zakażeniu. Skupiliśmy się na STAT1 i STAT3 jako kluczowych efektorach sygnalizacji pośredniczonej przez IFN- i gp130 w sercu. Sygnalizacja gp130 jest ważna dla przeżycia komórek serca; jednak nie wiadomo, czy odgrywa on rolę w patogenezie infekcji wirusowej. Trzeciego dnia zarówno STAT1, jak i STAT3 były silnie aktywowane, co wykazano przez fosforylację białka (Figura 1a). Znaleźliśmy również indukcję genów reagujących na IFN, takich jak IFN czynnik regulator-1 (IRF1) i FcyRI (Figura 1b). Te wyniki są zgodne z aktywacją sygnalizacji IFN i gp130 w sercu na tym wczesnym etapie in-fection. Co ważne, wewnętrzne negatywne regula- ry sygnalizacji IFN i gp130, SOCS1 i SOCS3 były silnie eksprymowane w czasie podobnym do indukcji fosforylacji STAT, co wskazuje na aktywację obwodu JAK-STAT-SOCS w tym wczesnym punkcie czasowym ( Figura 1b). Aby określić korelację między aktywacją obwodu JAK-STAT-SOCS a infekcją wirusową, zmierzyliśmy miano wirusa w sercu za pomocą testu tworzenia łysinek. Miano wirusa wzrosło po 2 dniach i osiągnęło najwyższą wartość po 3 dniach od zakażenia (Figura 1c). Wyniki te pokazują, że punkt czasowy, w którym aktywowana jest sygnalizacja JAK-STAT, pojawia się wkrótce po wykryciu zakażenia wirusem w sercu, co wskazuje na potencjalnie ważną rolę sygnalizacji JAK-STAT we wczesnych stadiach zakażenia. Jak wykazano wcześniej (4), wirusowa infekcja serca była związana z zaburzeniem sarkolememy, które jest wykrywane jako barwienie błękitem Evansa w sercu. Niebieski barwnik Evansa zogniskował się z obecnością wirusa w komórce (ryc. 1d), co wskazuje, że rozerwana błona sarcomiczna jest bezpośrednim wynikiem zakażenia CVB3. Określiliśmy procentowo obszar niebieskiego barwnika Evansa w przekroju serca jako marker efektu cytopatycznego za pośrednictwem wirusa (Figura 1c, szare słupki). Rozerwanie sarkolemy rozpoczęło się w dniu 3 i osiągnęło szczyt w dniu 4, demonstrując znaczenie tego okresu w procesie chorobowym. Figura 1. Korelacja wywołanego CVB3 uszkodzenia serca i aktywacja JAK-STAT. (a) Myszy zakażono CVB3. Lizat białka z serca poddano blottingowi we wskazane dni po inokulacji CVB3 i sondowano wskazanymi przeciwciałami. (b) Northern blot całkowitego RNA z serca po inokulacji CVB3 badano pod kątem ekspresji IRF1, FcyRI, SOCS1 i SOCS3. 28S i 18S RNA przedstawiono jako kontrole. (c) Miano wirusa i rozerwanie błony komórkowej serca w ciągu 5 dni po inokulacji CVB3. Czterotygodniowe samce myszy Balb / c zaszczepiono dootrzewnowo 103 PFU CVB3 i uśmiercano we wskazanym dniu. Niebieski barwnik Evans wstrzyknięto dootrzewnowo 4 godziny przed poświęceniem (4). Lewy panel pokazuje przebieg czasowy miana wirusa (linia ciągła) i procent powierzchni niebieskiego barwnika Evansa w sercu (szare słupki). Powierzchnie dodatnie dla barwnika Evansa niebieskiego oznaczono ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania NIH (NIH, Bethesda, Maryland, USA). Prawe panele przedstawiają niebieski barwnik Evansa – ujemny (dzień 0) i pozytywny (dzień 3) (jaśniejsze czerwone obszary barwienia)
[patrz też: olej lniany na odchudzanie, podkolanówki kompresyjne, niedobór witaminy d3 objawy u dorosłych ]
[więcej w: osocze bogatopłytkowe opinie, tomaszowskie centrum zdrowia, olej lniany na odchudzanie ]