Supresor sygnalizacji a1 (SOCS1) cytokiny jest nowym celem terapeutycznym dla indukowanego przez enterowirusa uszkodzenia serca czesc 4

Dane zebrano od trzech myszy dla każdego punktu czasowego i wyrażono jako średnie. SE. (d) Podwójne immunobarwienie zakażonego serca pokazuje, że komórki, które są dodatnie pod względem niebieskiego barwnika Evansa, są również dodatnie pod względem wirusowych białek kapsydowych. Lewy panel przedstawia barwienie immunofluorescencyjne z przeciwciałem anty-CVB3 (zielone), a środkowy panel pokazuje pobór barwnika niebieskiego Evansa (czerwonego) w tym samym polu. Prawy panel to scalony obraz. Skalowane pręty: mm (c); 50 m (d). P-STAT1, fosfo-STAT1; P-STAT3, fosfo-STAT3. Zwiększona replikacja wirusa i uszkodzenie mięśnia sercowego u myszy transgenicznych SOCS1. Ponieważ sygnalizacja JAK-STAT i jej regulator ujemny, SOCS, są indukowane w sercach zakażonych CVB3, staraliśmy się określić wpływ ekspresji SOCS i jej potencjalną rolę jako negatywnego regulatora aktywacji JAK w zakażonym mięśniu sercowym. W związku z tym wygenerowaliśmy transgeniczne myszy eksprymujące znakowany Myc SOCS1 pod kontrolą promotora ciężkiego łańcucha p-miozyny (. -MHC) swoistego wobec miocytów serca. Ekspresja transgenu została potwierdzona przez immunoblotting z przeciwciałem anty-Myc w czterech liniach myszy (Figura 2a). Szczenięta myszy transgenicznych SOCS1 rodziły się normalnie i rosły do dorosłości bez zwiększonej śmiertelności. Badanie histologiczne transgenicznych myszy z sercami SOCS1 po 16 tygodniach nie ujawniło żadnych dowodów na martwicę, zwłóknienie komorowe lub rozregulowanie miofibrylarne. Badanie echokardiograficzne nie wykazało również różnicy w funkcji lewej komory i grubości ściany u myszy transgenicznych SOCS1 w porównaniu z kontrolami z miotu (dane nie przedstawione). Zatem ogólna struktura i funkcja serca były prawidłowe u myszy niezakażonych transgenicznymi SOCS1. Figura 2 Zwiększone uszkodzenie mięśnia sercowego, replikacja wirusa i śmiertelność u myszy transgenicznych SOCS1. (a) Ekspresję SOCS1 znakowanego Myc w sercu porównano między czterema liniami transgenicznymi SOCS1 (A (D) poprzez immunoblotting z przeciwciałem anty-Myc (górny panel). Wyciągi z tkanki serca dla białka (dolny lewy panel) i RNA (dolny prawy panel) z dwóch linii typu dzikiego i dwóch linii transgenicznych myszy (A i B) przygotowano trzy dni po inokulacji CVB3 i sondowano, jak pokazano. (b) Myszy transgeniczne typu dzikiego i SOCS1 (4-tygodniowe samce) zaszczepiono 103 PFU wirusa (n = 15). Wskaźnik przeżywalności u myszy transgenicznych SOCS1 był znacznie niższy niż u zakażonych myszy z rodzaju dzikiego (P <0,0001). (c) Pobór barwnika niebieskiego Evansa w sercu znacznie wzrósł u myszy transgenicznych, które przeżyły SOCS1 w dniu 4 po zakażeniu (czerwona plama, lewe panele). Pokazano procent pola niebieskiego Evansa w sercach (prawy panel, średnia. SE, n = 3, * P <0,01). (d) Zwiększone miano wirusa w sercu, ale nie wątroba transgenicznych myszy SOCS1. Miana wirusa w transgenicznych i dzikiego typu sercach i wątrobie SOCS1 od 3 do 5 dni po zakażeniu (średnia wartość SE, n = 3, * P <0,01 w porównaniu do transgenicznych myszy SOCS1 z miotami typu dzikiego). (e) Barwniki hematoksyliny i eozyny reprezentatywnych transgenicznych serc myszy SOCS1 typu dzikiego i 4 dni po zakażeniu. Zauważ zakrzep w centrum komory (prawy panel). Skalowane pręty: mm (c); 100. M (e, środek); 200. M (e, z prawej). Tg, transgeniczny; P-STAT1, fosfo-STAT1; P-STAT3, fosfo-STAT3. Aby określić, czy ekspresja SOCS1, a następnie hamowanie sygnalizacji JAK może mieć znaczący pod względem funkcjonalnym efekt w ustalaniu zakażenia kardiotropowym CVB3, zaszczepiliśmy myszy transgeniczne SOCS1, które zostały krzyżowane wstecznie ze szczepem Balb / c, który jest wysoce podatny na CVB3. infekcja i ich dzikie rodzeństwo z CVB3. Zgodnie z faktem, że SOCS1 hamuje sygnalizację JAK stymulowaną przez różne cytokiny (13, 14, 17), stwierdziliśmy, że zarówno aktywacja STAT1 i STAT3, jak i indukcja genów odpowiadających na IFN przez zakażenie CVB3 były całkowicie zahamowane u myszy transgenicznych SOCS1, wskazujące, że transgeniczne myszy SOCS1 mogą być odporne na stymulację przez IFN i cytokiny aktywujące gp130 (Figura 2a). Ponadto myszy transgeniczne SOCS1 zakażone CVB3 miały znacznie wcześniejszą śmiertelność w porównaniu z ich myszami z dzikiego typu. Do dnia 4 po zakażeniu ponad 90% myszy transgenicznych SOCS1 było martwych. Mniej niż 10% zakażonych kontroli padło w tym samym punkcie czasowym (rysunek 2b). Aby określić, czy zwiększona śmiertelność u transgenicznych myszy SOCS1 była związana ze zwiększonym uszkodzeniem mięśnia sercowego, ocenialiśmy obszar niebieskiego barwnika Evansa u myszy transgenicznych SOCS1 i myszy z miotu typu dzikiego w dniu 4 po zakażeniu, zanim myszy zmarły z powodu infekcji. Stwierdzono, że procentowy obszar uszkodzenia mięśnia sercowego u myszy transgenicznych SOCS1 był znacznie zwiększony w porównaniu z myszami typu dzikiego z rodzeństwem (Figura 2c). [hasła pokrewne: tomaszowskie centrum zdrowia, badania kontrolne po urlopie macierzyńskim, centrum onkologii warszawa roentgena ] [więcej w: niedobór witaminy d3 objawy u dorosłych, przygotowanie do rektoskopii, centrum onkologii warszawa roentgena ]