Wydzielone białko 4 związane z białkami szprotu jest silnym czynnikiem fosfatycznym pochodzenia nowotworowego ad 5

W celu wykrycia sFRP-4 w tkankach nerkowych szczurze homogenaty tkanek nerek poddano elektroforezie na żelu poliakryloamidowym SDS, a elektroforezowane białka przeniesiono na membrany PVDF, jak opisano powyżej (31, 32). Przeciwciała mAb skierowane przeciwko sFRP-4 użyto do sondowania membran PVDF, a związane przeciwciała antysFRFR-4 wykrywano stosując anty-mysie IgG, sprzężone z HRP Ab. Statystyka. Wartości wyrażono jako średnie plus lub minus SE. Porównania statystyczne dla grup 1. 4 zostały wykonane przy użyciu sparowanego testu t. Porównania pomiędzy wieloma odstępami (grupy 5 i 6) zostały wykonane przy użyciu jednokierunkowej ANOVA, a następnie testu najmniej znaczących różnic Fishera. Porównanie statystyczne dla oznaczenia wychwytu fosfatycznego wykonano przy użyciu niesparowanego testu t. Wartość AP mniejsza niż 0,05 została uznana za znaczącą. Wyniki Wydzielany FRP-4 specyficznie hamuje zależny od sodu transport fosforanu w komórkach OK. Aby określić, czy sFRP-4 bezpośrednio hamuje zależny od sodu transport fosforanu w komórkach OK utrzymywanych w hodowli, dodaliśmy wzrastające ilości sFRP-4 do supernatantów tych komórek (Figura 1). Jak można zauważyć, dawka 250 pg / ml sFRP-4 na studzienkę spowodowała statystycznie istotny spadek wychwytu fosforanu zależnego od sodu w komórkach OK utrzymywanych w hodowli. Transport glukozy zależny od sodu (sFRP-4, 10,26. 0,33 nmol / mg białka, w porównaniu do nośnika, 9,62. 0,45 nmol / mg białka; P = NS) i transport alaninowy zależny od sodu (sFRP-4, 0,059. 0,008 nmol / mg białko w porównaniu do nośnika, 0,083. 0,009 nmol / mg białka; P = NS) nie zmieniło się znacząco. Wpływ krótkotrwałej infuzji sFRP-4 na transport substancji rozpuszczonej w nerkach, mRNA n-hydroksylazy D-25-hydroksywitaminy D i mRNA 25-hydroksylazy 25-hydroksywitaminy D. Jak pokazano na Figurze 2, sFRP-4 w infuzji u normalnych szczurów w ciągu 2 godzin spowodował wyraźny wzrost frakcyjnego wydalania fosforanu (FEPi) z 14%. 2% do 34%. 5%, myślisz. SEM; P <0,05. FEPi był stabilny (14%. 3% do 18%. 2%, średni. SEM; P = NS) u szczurów nasyconych nośnikiem. Frakcyjne wydalanie sodu (FENa) wzrosło u szczurów, którym podawano sFRP-4. z 1,1%. 0,3% do 2,7%. 0,5% (średnia . SEM; P <0,05). W grupie otrzymującej podłoże odnotowano mniejszy wzrost FENa (0,3%. 0,1% do 1,2%. 0,3%, średnia. SEM; P <0,05). Frakcyjne wydalanie wapnia (FECa) nie zmieniło się w żadnej z grup. GFR i MAP były stabilne w obu grupach zwierząt (dane nie przedstawione). Należy zauważyć, że wydalanie cAMP z moczem nie zmieniło się ani we wszczepionym sFRP-4 . (23,6. 2,6 do 25,5. 2,6 nmol / min; P = NS), ani we wlewie we wstrzyknięciach (24,6. 1,2 do 28,2. 3,5 nmol / min; P = NS) grupy szczurów. Stężenie fosforanów w surowicy i wapnia w surowicy nie zmieniało się podczas krótkotrwałej infuzji w sFRP-4. Morfologia cytochromu P450 nerkowego 25-hydroksywitaminy D (SFRP-4, 2,29 x 10 13 1,18 x 10 13 mol / pg RNA w porównaniu do nośnika, 4,36 x 10 13 1,82 x 10 13 mol / pg RNA; P = NS) i 24-hydroksylazowe mRNA cytochromu P450 (sFRP-4, 3,73 x 10 x 14 x 1,35 x 10 14, w stosunku do nośnika, 1,45 x 10 14 4,0 x 10 15 mol / pg RNA; P = NS) stężenia były podobne w sFRP-4 i grupach otrzymujących nośnik. Figura 2 Wpływ infuzji sFRP-4 na wydalanie substancji rozpuszczonej u nietkniętych szczurów. Nienaruszonym szczurom podawano sFRP-4 (czarne słupki, grupa 2) w dawce 0,3 .g / kg / h lub nośnik (białe słupki, grupa 1) przez wlew dożylny w ciągu 2 godzin. C1 wskazuje okres równowagi przed infuzją sFRP-4 lub nośnika. C2 oznacza okres doświadczalny, podczas którego podawano sFRP-4 lub nośnik. Frakcjonalne wydalanie nieorganicznego fosforanu, sodu i wapnia mierzono zgodnie z opisem w tekście. * P <0,05. Równoległe eksperymenty na myszach również przeprowadzono z użyciem rekombinowanego białka pochodzącego z komórek ssaczych lub owadzich. Wydzielony FRP-4 wywołał również 3,1-krotny wzrost FEPi u myszy (P <0,05). Wyniki te potwierdzają działanie sFRP-4 u innego gatunku i pokazują, że sposób wytwarzania rekombinowanego sFRP-4 (systemy ekspresji ssaków versus owadów) nie ma istotnego wpływu na funkcję białka. Fosfatematyczne działanie sFRP-4 jest niezależne od PTH. Aby określić, czy PTH jest niezbędny do działania fosfatycznego sFRP-4, wprowadziliśmy dożylnie sFRP-4 u szczurów z ostrymi TPTX. Thyro-paratyroidektomia była związana ze zmniejszeniem podstawowych FEPi z około 15% u nietkniętych zwierząt do około 0,7% u zwierząt TPTX. Podstawowa FECa wzrosła z 0,5% do 1,5%, a stężenie wapnia w surowicy zmniejszyło się z około 10,5 mg / dl do 8 mg / dl [przypisy: rak płaskonabłonkowy płuca, pompa insulinowa refundacja, podkolanówki kompresyjne ] [patrz też: badania kontrolne po urlopie macierzyńskim, laserowe wybielanie zębów cena, szczepionki na meningokoki ]