Wydzielone białko 4 związane z białkami szprotu jest silnym czynnikiem fosfatycznym pochodzenia nowotworowego cd

Do transportu alaninowego zależnego od sodu dodano 0,1 mM L-alaniny i 3H-alaniny (końcowa aktywność specyficzna, Ci / ml). Do transportu glukozy dodano 0,1 mM metylo-a-glukopiranozydu i metylo (a-d- [14C] gluko) piranozydu (końcowa aktywność właściwa, 0,2 Ci / ml). Transport fosforanu, alaniny i metylo-a-glukopiranozydu badano osobno. Każdą reakcję transportu mierzono w trzech lub czterech powtórnych studzienkach i każdy test obejmował kontrolne ślepe próby w celu skorygowania rozpuszczonej substancji związanej z powierzchniami komórkowymi, przestrzeniami wewnątrzkomórkowymi i naczyniem hodowlanym. Figura Wpływ sFRP-4 na wychwyt fosforanu zależny od sodu w komórkach OK utrzymywanych w hodowli. * P <0,05. Zwierząt. Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Institutional Animal Care and Use Committee of Mayo Clinic. Samce szczurów Sprague-Dawley ważące 250-300 g zakupiono od Harlan Sprague Dawley Inc. (Madison, Wisconsin, USA). Karmiono je standardową formułą gryzoni zawierającą 0,7% fosforu i 0,5% wapnia i odpowiednią ilością witaminy D. W dniu ostrych eksperymentów szczury znieczulono wstrzyknięciem dootrzewnowym 100. 150 mg / kg masy ciała 5 sekund. kwas -butylo-etylo-2-tiobarbiturowy (inactin, Byk Gulden Konstanz, Hamburg, Niemcy). Zwierzęta umieszczono na ogrzewanym stole, aby utrzymać temperaturę ciała między 36 ° C a 38 ° C. Po tracheostomii cewnik PE-50 umieszczono w lewej tętnicy szyjnej, aby monitorować średnie tętnicze ciśnienie krwi (MAP) i pobierać próbki krwi. Kolejny cewnik umieszczono w lewej żyle szyjnej do wlewu dożylnego 1% inuliny w 0,9% NaCl i 2,25% BSA z szybkością 1% na masę ciała na godzinę i do podawania leku. Cewnik PE-90 umieszczono w pęcherzu w celu pobrania moczu. Grupy badanych zwierząt zostały omówione poniżej. Krótkotrwały (2-godzinny) wlew nośnika (grupa 1, n = 7) lub sFRP-4 (grupa 2, n = 10) i wpływ na wydzielanie substancji rozpuszczonej u zdrowych szczurów. Po 1,5-godzinnym okresie rekonwalescencji pobrano jedną 30-minutową próbkę klirensu moczu (C1) i około 35 (l podłoża zawierającego PBS i 0,1% BSA (grupa 1) lub sFRP-4 w podłożu (grupa 2; 0,3. g / kg / h sFRP-4) dodano do infuzji inulina / BSA. Po 45-minutowym okresie stabilizacji, pobierano klirens moczu w ciągu 60 minut (C2) od zwierząt traktowanych zaróbką lub sFRP-4 (3. Próbkę krwi pobrano w połowie okresu rozliczeniowego. Pod koniec doświadczenia nerki usunięto w celu izolacji całkowitego RNA i oznaczenia ilościowego mRNA cytochromu P450 25-hydroksywitaminy D1-hydroksylazy i 25-hydroksywitaminy D 24-hydroksylazy P450. Krótkotrwały (2-godzinny) wlew dożylny (grupa 3, n = 6) lub sFRP-4 (grupa 4, n = 10) i wpływ na wydalanie substancji rozpuszczonej u szczurów z tarczycowo-przytarczycą. Protokoły te są identyczne z tymi opisanymi dla grup i 2, z tym wyjątkiem, że szczury tarczycy z przytarczycą (TPTX) badano 2 godziny po zakończeniu tyreostyminektomii. Skuteczną tyro-paratyroidektomię potwierdzono znacznym zmniejszeniem frakcjonowanego wydalania frakcji fosforanowej w moczu, zwiększonym ułamkowym wydalaniem wapnia i występowaniem hipokalcemii. Długotrwały (8-godzinny) wlew dożylny (grupa 5, n = 5) lub sFRP-4 (grupa 6, n = 7) i wpływ na wydzielanie substancji rozpuszczonej, stężenia 1,25-dihydroksywitaminy D w surowicy i 25- hydroksylazy D 1-hydroksylazowej cytochromu P450 i 24-hydroksylazy 25-hydroksy witaminy D, cytochromu P450. Te protokoły są identyczne z opisanymi dla poprzednich grup, z tym wyjątkiem, że po pobraniu kontrolnym (C1), 1-godzinne prześwity zostały wykonane po 4 godzinach (C2) i 7 godzinach (C3) po rozpoczęciu wlewu lub wlewów sFRP-4. Pod koniec eksperymentu pobrano krew do pomiaru (3, 25-dihydroksywitaminy D i zebrano nerki w celu izolacji mRNA i oceny 25-hydroksylazy D-hydroksylazy 25-hydroksywitaminy P450 i 25-hydroksywitaminy D 24- mRNA hydroksylazy cytochromu P450 za pomocą ilościowej RT-PCR w czasie rzeczywistym. Aby określić, czy zmniejszenie stężenia fosforanu w surowicy było związane z odpowiednim wzrostem stężeń mRNA cytochromu P450 25-hydroksywitaminy D1 hydroksylazy P450, szczury utrzymywano na diecie z 0,1% fosforanem (niskie Pi) lub na diecie z 0,4% fosforanem (normalnie pi) przez okres tygodnia, tak aby doprowadzić do niewielkiego zmniejszenia stężenia fosforanu w surowicy do poziomu obserwowanego po wlewie sFRP-4. Pomiary w surowicy i moczu. Stężenie fosforanów w surowicy i moczu oznaczono metodą Chen et al. (24). Stężenie inuliny w surowicy i moczu mierzono metodą anthrone (25). Stężenie sodu mierzono w moczu przy użyciu fotometru płomieniowego Instrumentation Laboratory (Instrumentation Laboratory, Wilmington, Massachusetts, USA) [hasła pokrewne: podkolanówki kompresyjne, rak płaskonabłonkowy płuca, ile kalorii ma mozzarella ] [podobne: rak płaskonabłonkowy płuca, podkolanówki kompresyjne, odchudzanie roku vita slim opinie ]